AAT Bioquest 11503/11504 Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Green/*Blue Fluorescence*

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美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學研究、診斷研發及藥物開發的科學家研發、生產和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學檢測領域，包括吸收（顏色），熒光和發光技術。AAT Bioquest的產品幫助quan世界的科學家和生物醫藥研究者更好的了解生物化學，免疫學，細胞生物學和分子生物學等領域。AAT Bioquest會不斷介紹新產品，快速的豐富各個領域的產品。

AAT Bioquest  11503 Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Green Fluorescence* 100 Tests

AAT Bioquest  11504 Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Blue Fluorescence* 100 Tests

 AATBioquestCell Meter過氧化氫測定試劑盒

AAT Bioquest  11503 Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Green Fluorescence* 100 Tests，產品說明：

過氧化*（H2O2）是一種活性氧代謝副產物，可作為許多氧化應激相關狀態的關鍵調節劑。它涉及許多與哮喘、動脈粥樣硬化、糖尿病血管病變、骨質疏松癥、許多神經退行性疾病和唐氏綜合癥有關的生物事件。也許過氧化*生物學最有趣的方面是最近的報道，即抗體具有將分子氧轉化為過氧化*的能力，有助于免疫系統的正常識別和破壞過程。測量這種反應性物質將有助于確定氧化應激如何調節不同的細胞內途徑。該細胞計™過氧化*檢測試劑盒使用我們du特的OxiVision™ Green過氧化*傳感器來量化活細胞中的過氧化*。OxiVision™ Green是細胞滲透性的，當它與過氧化*反應時會產生綠色熒光。該試劑盒是一種優化的“混合和讀取"檢測形式，與 HTS 液體處理儀器兼容。

組件

組件 A： 1瓶

組分B：H2O2 1 瓶（3% 穩定溶液，200 μL）

組分C：檢測緩沖液 1 瓶 （20 mL）

組件D：二甲基丙*酸甲* 1 瓶 （200 μL）

示例協議

一目了然

溶液分析方案摘要

1. 準備并添加 Amplite™ 綠色過氧化物傳感器工作溶液 （50 μL）

2. 添加 H2O2標準品或測試樣品 （50 μL）

3. 在室溫下孵育 15 - 60 分鐘

4. 讀取Ex/Em = 490/525 nm時的熒光強度（截止= 515 nm）

重要說明

在開始實驗之前，在室溫下解凍所有試劑盒成分。

活細胞檢測方案摘要

1. 在生長培養基中制備細胞

2. 用Amplite™綠色過氧化物傳感器工作溶液對細胞進行染色，并孵育所需的時間

3. 用測試化合物處理細胞

4. 在Ex/Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）下監測熒光強度，底部讀取模式

重要說明

Amplite™ 綠色過氧化物傳感器可以被動加載到活細胞中并報告細胞內 H 的微摩爾變化2O2濃度。以下是建議的顯微鏡成像方案，可以修改以滿足特定的研究需求。

儲備液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環。

1. 安培綠色過氧化物傳感器儲備溶液 （250X）：

將 50 μL DMSO（組分 D）加入安培綠色過氧化物傳感器（組分 A）的小瓶中，制成 250X 安培™™綠色過氧化物™傳感器儲備溶液。避光。

2. H₂O₂標準溶液 （20 mM）：

加入 22.7 μL 的 3% H2O2（0.88 M，組分 B）放入 977 μL 檢測緩沖液（組分 C）中，制成 20 mM H₂O₂標準解決方案。注意：稀釋后的H₂O₂標準溶液不穩定。未使用的部分應丟棄。

標準溶液的制備

H₂O₂ 標準

加入 50 μL 20 mM H2O2標準溶液到 950 μL 檢測緩沖液（組分 C）中，得到 1000 μM H₂O₂標準解決方案。取 1000 μM H₂O₂標準溶液并進行 1：3 連續稀釋以獲得連續稀釋的 H₂O₂標準品（HS1 - HS7）與測定緩沖液（組分C）。

工作溶液的制備

將 20 μL 250X 安培™綠色過氧化物傳感器儲備溶液加入 5 mL 檢測緩沖液（組分 C）中，制成 Amplite™ 綠色過氧化物傳感器工作溶液。

實驗方案樣本

1. 準備H₂O₂標準品（HS）、空白對照（BL）和測試樣品（TS）根據表1和表2中提供的布局。對于 384 孔板，每孔使用 25 μL 試劑而不是 50 μL。

2. 向每個 H 孔中加入 50 μL Amplite™ 綠色過氧化物傳感器工作溶液₂O₂標準、空白對照和測試樣品，使總H₂O₂測定體積為 100 μL/孔。對于 384 孔板，將 25 μL Amplite™ 綠色過氧化物傳感器工作溶液添加到每個孔中，總體積為 50 μL/孔。

3. 將反應在室溫下孵育15至30分鐘，避光。

4. 使用熒光酶標儀監測熒光增加，激發= 490±10，發射= 520±10nm（最佳Ex / Em = 490 / 525 nm，截止= 515 nm）。

運行H₂O₂活細胞測定：

1. 根據需要激活單元格。

2. 用PBS緩沖液洗滌細胞，用100μL/孔Amplite™綠色過氧化物傳感器工作溶液孵育細胞5至60分鐘或您想要的時間。對于 384 孔板，加入 25 μL/孔的 Amplite™ 綠色過氧化物傳感器工作溶液。注意：對于動力學測量，可以在添加處理之前對細胞進行染色。

3. 使用熒光板讀數器（底部讀取模式）在Ex / Em = 490 / 525 nm（截止= 515 nm）下監測熒光增加，或使用FITC通道用熒光顯微鏡對熒光變化進行成像。

AAT Bioquest  11504 Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Blue Fluorescence* 100 Tests，產品說明：

過氧化*是一種活性氧代謝副產物，可作為許多氧化應激相關狀態的關鍵調節劑。它涉及許多與哮喘、動脈粥樣硬化、糖尿病血管病變、骨質疏松癥、許多神經退行性疾病和唐氏綜合癥有關的生物事件。這種反應性物質的測量有助于確定氧化應激如何調節各種細胞內途徑。該細胞計™細胞內熒光過氧化*檢測試劑盒使用我們du特的OxiVision™ Blue過氧化物傳感器來量化活細胞中的過氧化*。OxiVision™ 藍色過氧化物傳感器具有細胞滲透性，與過氧化*反應時會產生藍色熒光。該試劑盒提供了一種靈敏的工具，用于監測活細胞中的過氧化*水平，并經過優化，可用于熒光顯微鏡。

組件

組件 A：OxiVision™ 藍色過氧化物傳感器 1瓶

組分B：檢測緩沖液 1 瓶 （20 mL）

組件C：DMSO 1 瓶 （100 μL）

示例協議

一目了然

協議摘要

1. 在生長培養基中制備細胞

2. 使用OxiVision™藍色過氧化物傳感器對細胞進行染色

3. 用測試化合物處理細胞

4. 使用 DAPI 濾光片或防爆/電磁 = 405/450 nm 監測熒光強度

重要說明

在開始實驗之前，在室溫下解凍所有試劑盒成分。

儲備液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環。

1. OxiVision 藍色過氧化物傳感器儲備溶液 （500X）：

將 40 μL DMSO（組分 C）加入 OxiVision 藍色過氧化物傳感器（組分 A）的小瓶中，充分混合制成 500X OxiVision™™™ 藍色過氧化物傳感器儲備溶液。注意：20 μL 重構的 OxiVision™ 藍色過氧化物傳感器儲備溶液足以用于 1 個板。應及時使用儲備溶液。避光。

工作溶液的制備

將 10 μL 的 500X OxiVision 藍色過氧化物傳感器儲備溶液加入 500 μL 檢測緩沖液（組分 B）中，并充分混合，制成 OxiVision™™ 藍色過氧化物傳感器工作溶液。注意：此OxiVision™ 藍色過氧化物傳感器工作溶液不穩定;使用前根據需要準備。

實驗方案樣本

1. 在 10 孔細胞板中每孔 96 μL 細胞培養物中加入 2 μL/孔（5 孔板）或 384.90 μL/孔（96 孔板）的 OxiVision™ 藍色過氧化物傳感器工作溶液，或在 22 孔細胞板中每孔加入 5.384 μL 細胞培養物。注意：染色前無需清洗細胞。建議在全培養基中對細胞進行染色。

2. 用測試化合物在全培養基中或在所需的緩沖液中在 37°C 下處理細胞所需的時間。對于對照樣品（未處理的細胞），加入相應量的復合緩沖液。注意：建議在全培養基中處理細胞。但是，如果測試化合物對血清敏感，則可以在治療前吸走生長培養基和血清因子。抽吸后，將1X Hank的鹽溶液和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的緩沖液添加到細胞中?；蛘?，可以在無血清培養基中處理細胞。我們在100°C的全培養基中用37μM過氧化*處理Jurkat細胞90分鐘以誘導過氧化*。

3. 用DPBS洗滌細胞1-2次，并更換為100 uL /孔（用于96孔板）或25 uL /孔（用于384孔板）測定緩沖液（組分C）。

4. 使用帶有DAPI濾光片的熒光顯微鏡拍攝圖像。

 AATBioquestCell Meter過氧化氫測定試劑盒

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